uv1901pc双光束紫外可见分光光度计测苏丹红含量

uv1901pc双光束紫外可见分光光度计测样品中的苏丹红含量所需仪器与试剂

uv1901pc双光束紫外可见分光光度计(厚度为1cm的石英皿),上海奥析科学仪器有限公司

产品;R-250旋转浓缩器,

2695液相色谱仪,美国Waters公司产品;

ZQ2000液质联用仪,美国Waters公司产品;

FS-450超声波萃取仪,上海奥析科学仪器有限公司;

HSG硅胶板,

苏丹红Ⅲ、Ⅳ号标准品,

苏丹红Ⅲ、Ⅳ号标准溶液100μg/mL.分别准确称取25mg苏丹红Ⅲ、Ⅳ标准品,用正己烷溶解并稀释定容至250mL混匀.

展开剂:V(正己烷):V(乙酸乙酯)=100∶0.50.

正己烷、乙mi、乙醇、KOH、无水硫酸钠,均为分析纯.

乙腈、丙酮为色谱纯.

所用水均为二次去离子水.1.2 操作步骤1.2.1 样品处理

胡椒粉、红辣椒粉、粉状调味品、酱油、辣椒酱,均准确称取1.00～5.00g,置于250mL锥形瓶中,加入100mL分析纯正己烷,超声振荡20min,过滤,洗涤,定容.辣椒油、香肠、肉类及油类产品,均准确称取5.00g,置于250mL锥形瓶中,加入30mL乙醇溶液,荡动锥形瓶使样品分散后,加入10.0mLKOH水溶液(质量分数为50%),回流皂化30min.分别用50mL乙mi提取三次,合并乙mi溶液,用质量分数为5%硫酸钠水溶液洗涤3次.将乙mi液旋转蒸发至近干后,用正己烷定容5mL.1.2.2 标准曲线的绘制分别准确吸取苏丹红Ⅲ、Ⅳ标准液:0.00、0.05、0.10、0.50、1.00、1.50、2.00、3.00mL(分别含有0.0、5、10、50、100、150、200、300μg相应的苏丹红),用正己烷定容至10.0mL,混匀.在波长230nm处,用厚度为1cm石英比色皿,以空白溶液为参比在UV1901PC紫外可见分光光度计测定吸光度,以吸光度值A对浓度c作图,绘制工作曲线.1.2.3 样品分析硅胶板先用展开剂蒸气饱和,再用微量进样器将试样溶液与苏丹红Ⅲ、Ⅳ标准液同时点于同一薄层板上.*点:苏丹红Ⅲ3μL;第二点;苏丹红Ⅳ3μL;在苏丹红一侧点样液50μL(重复5个点).放入展开缸中,上行展开,室温晾干,与标准比较定性.同时,刮取与标准品相同位置的样品斑点和相同面积的空白硅胶,分别置于50mL烧杯中,加适量正己烷提取并定容至5.00mL.用uv1901pc双光束紫外可见分光光度计测定吸光度.根据吸光度值、取样量、点样量进行含量计算.

2 结果与讨论

2.1 苏丹红Ⅲ、Ⅳ的吸收光谱

按照操作步骤,将苏丹红Ⅲ、Ⅳ5μg/mL标准溶液在uv1901pc双光束紫外可见分光光度计上绘制其吸收光谱,,苏丹红Ⅲ、Ⅳ在紫外区230nm处,可见光区苏丹红Ⅲ在500nm处、苏丹红Ⅳ在510nm处存在吸收峰,显然,230nm为zui大吸收波

长,故选择230nm为检测波长.

2.2 样品处理

本实验采用超声萃取的方式提取目标物,并对脂类含量高的样品皂化后再用乙mi提取.

2.3 干扰因素在测定苏丹红色素时,食品中天然红色素的存在极大地干扰了检测结果.食品中存在的天然红色素主要是辣椒红色素.辣椒红色素是一类存在于成熟红辣椒果实中的四萜类橙红色色素.其中极性较大的红色组分主要是辣椒红素和辣椒玉红素,占总量的50%～60%,另一类是极性较小的黄色组分,主要成分是β-胡萝卜素和玉米黄质,它们具有VA活性.

辣椒红素的外观为深红色粘性油状液体,易溶于植物油、丙酮、乙mi、三lv甲wan,溶于乙醇,不溶于甘油和水,具有较好的分散性、耐热性、耐酸性、耐碱性,但耐光性较差.辣椒红色素组分的分子结构中所有的发色团(Chromophore)使其紫外-可见光区有着*的吸光区,因而其深液或结晶在可见光下具有十分绚丽的红、橙或黄色.目前已知,辣椒红素zui大的吸收峰的波长λmax约为460～475nm.在本实验中,采用薄层分离的方法,使辣椒红素与苏丹红分离,进而在苏丹红色素的紫外光区zui大吸收波长(230nm)处进行定量测定,避免了天然色素的干扰.2.4 展开剂的选择苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ的结构相近,后者比前者多了两个甲基,疏水性增强,利用这个性质,并参考了大量资料,实验了几十种不同的展开剂,其中展开效果较好的是:1)V(三lv甲烷wan)∶V(正己烷)=1∶1;2)V(sanlv甲wan)∶V(石油mi)∶V(醋酸)=75∶25∶0.5;3)V(正己烷)∶V(二lv甲wan)∶V(氨水)=6∶4∶0.18;4)V(正己烷)∶V(乙suan乙zhi)=100∶0.66.

2.4.实验证明,展开剂4)能使样液与标液同时分离出苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ,分离效果良好,是检测苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ的良好展开剂.

2.5 回归方程和线性范围按上述工作曲线的绘制方法绘制标准曲线,得到苏丹红Ⅲ、Ⅳ的回归方程

2.6 精密度与检出限

分别将质量浓度为5μg/mL苏丹红Ⅲ、Ⅳ按实验方法进行测定(n=10),得出其相对标准偏差分别为2.46%和1.57%.同时测定空白溶液(n=10)获得检出限苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ为0.05μg/mL.2.7 回收率与样品分析取同一空白辣椒面样品8份,加入不同量的苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ,按照操作步骤进行回收率试验

3.得出,苏丹红Ⅲ在辣椒面中的回收率在90%～94%之间,苏丹红Ⅳ在辣椒面中的回收率在90%～96%之间

uv1901pc双光束紫外可见分光光度计测样品中的苏丹红含量所需仪器与试剂

uv1901pc双光束紫外可见分光光度计(厚度为1cm的石英皿),上海奥析科学仪器有限公司

产品;R-250旋转浓缩器,

2695液相色谱仪,美国Waters公司产品;

ZQ2000液质联用仪,美国Waters公司产品;

FS-450超声波萃取仪,上海奥析科学仪器有限公司;

HSG硅胶板,

苏丹红Ⅲ、Ⅳ号标准品,

苏丹红Ⅲ、Ⅳ号标准溶液100μg/mL.分别准确称取25mg苏丹红Ⅲ、Ⅳ标准品,用正己烷溶解并稀释定容至250mL混匀.

展开剂:V(正己烷):V(乙酸乙酯)=100∶0.50.

正己烷、乙mi、乙醇、KOH、无水硫酸钠,均为分析纯.

乙腈、丙酮为色谱纯.

所用水均为二次去离子水.1.2 操作步骤1.2.1 样品处理

胡椒粉、红辣椒粉、粉状调味品、酱油、辣椒酱,均准确称取1.00～5.00g,置于250mL锥形瓶中,加入100mL分析纯正己烷,超声振荡20min,过滤,洗涤,定容.辣椒油、香肠、肉类及油类产品,均准确称取5.00g,置于250mL锥形瓶中,加入30mL乙醇溶液,荡动锥形瓶使样品分散后,加入10.0mLKOH水溶液(质量分数为50%),回流皂化30min.分别用50mL乙mi提取三次,合并乙mi溶液,用质量分数为5%硫酸钠水溶液洗涤3次.将乙mi液旋转蒸发至近干后,用正己烷定容5mL.1.2.2 标准曲线的绘制分别准确吸取苏丹红Ⅲ、Ⅳ标准液:0.00、0.05、0.10、0.50、1.00、1.50、2.00、3.00mL(分别含有0.0、5、10、50、100、150、200、300μg相应的苏丹红),用正己烷定容至10.0mL,混匀.在波长230nm处,用厚度为1cm石英比色皿,以空白溶液为参比在UV1901PC紫外可见分光光度计测定吸光度,以吸光度值A对浓度c作图,绘制工作曲线.1.2.3 样品分析硅胶板先用展开剂蒸气饱和,再用微量进样器将试样溶液与苏丹红Ⅲ、Ⅳ标准液同时点于同一薄层板上.*点:苏丹红Ⅲ3μL;第二点;苏丹红Ⅳ3μL;在苏丹红一侧点样液50μL(重复5个点).放入展开缸中,上行展开,室温晾干,与标准比较定性.同时,刮取与标准品相同位置的样品斑点和相同面积的空白硅胶,分别置于50mL烧杯中,加适量正己烷提取并定容至5.00mL.用uv1901pc双光束紫外可见分光光度计测定吸光度.根据吸光度值、取样量、点样量进行含量计算.

2 结果与讨论

2.1 苏丹红Ⅲ、Ⅳ的吸收光谱

按照操作步骤,将苏丹红Ⅲ、Ⅳ5μg/mL标准溶液在uv1901pc双光束紫外可见分光光度计上绘制其吸收光谱,,苏丹红Ⅲ、Ⅳ在紫外区230nm处,可见光区苏丹红Ⅲ在500nm处、苏丹红Ⅳ在510nm处存在吸收峰,显然,230nm为zui大吸收波

长,故选择230nm为检测波长.

2.2 样品处理

本实验采用超声萃取的方式提取目标物,并对脂类含量高的样品皂化后再用乙mi提取.

2.3 干扰因素在测定苏丹红色素时,食品中天然红色素的存在极大地干扰了检测结果.食品中存在的天然红色素主要是辣椒红色素.辣椒红色素是一类存在于成熟红辣椒果实中的四萜类橙红色色素.其中极性较大的红色组分主要是辣椒红素和辣椒玉红素,占总量的50%～60%,另一类是极性较小的黄色组分,主要成分是β-胡萝卜素和玉米黄质,它们具有VA活性.

辣椒红素的外观为深红色粘性油状液体,易溶于植物油、丙酮、乙mi、三lv甲wan,溶于乙醇,不溶于甘油和水,具有较好的分散性、耐热性、耐酸性、耐碱性,但耐光性较差.辣椒红色素组分的分子结构中所有的发色团(Chromophore)使其紫外-可见光区有着*的吸光区,因而其深液或结晶在可见光下具有十分绚丽的红、橙或黄色.目前已知,辣椒红素zui大的吸收峰的波长λmax约为460～475nm.在本实验中,采用薄层分离的方法,使辣椒红素与苏丹红分离,进而在苏丹红色素的紫外光区zui大吸收波长(230nm)处进行定量测定,避免了天然色素的干扰.2.4 展开剂的选择苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ的结构相近,后者比前者多了两个甲基,疏水性增强,利用这个性质,并参考了大量资料,实验了几十种不同的展开剂,其中展开效果较好的是:1)V(三lv甲烷wan)∶V(正己烷)=1∶1;2)V(sanlv甲wan)∶V(石油mi)∶V(醋酸)=75∶25∶0.5;3)V(正己烷)∶V(二lv甲wan)∶V(氨水)=6∶4∶0.18;4)V(正己烷)∶V(乙suan乙zhi)=100∶0.66.

2.4.实验证明,展开剂4)能使样液与标液同时分离出苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ,分离效果良好,是检测苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ的良好展开剂.

2.5 回归方程和线性范围按上述工作曲线的绘制方法绘制标准曲线,得到苏丹红Ⅲ、Ⅳ的回归方程

2.6 精密度与检出限

分别将质量浓度为5μg/mL苏丹红Ⅲ、Ⅳ按实验方法进行测定(n=10),得出其相对标准偏差分别为2.46%和1.57%.同时测定空白溶液(n=10)获得检出限苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ为0.05μg/mL.2.7 回收率与样品分析取同一空白辣椒面样品8份,加入不同量的苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ,按照操作步骤进行回收率试验

3.得出,苏丹红Ⅲ在辣椒面中的回收率在90%～94%之间,苏丹红Ⅳ在辣椒面中的回收率在90%～96%之间