UV1901PC紫外可见分光光度计测牛奶中蛋白质含量

纳氏试剂分光光度法测定乳与乳制品中蛋白质乳及乳制品是人们喜爱的常用保健食品，蛋白质含量的高低是其重要指标。蛋白质的测量方法凯氏定氮蒸馏法，样品消化后需要蒸馏滴定，操作繁杂，劳动力大，费时费力。纳氏试剂分光光度比色法测定，方法简便快捷，灵敏稳定。与原方法经T检验比较，无显著性差异。

UV1901PC紫外可见分光光度计测牛奶中蛋白质含量的原理

样品中蛋白质与硫酸和催化剂一同加热分解，分解的氨与硫酸生产硫酸铵，硫酸铵与纳氏试剂在碱性情况下生成黄至棕色化合物，与样品氮含量成正比。结果乘以换算系数，从而计算样品中蛋白质含量。

UV1901PC紫外可见分光光度计测牛奶中蛋白质含量需用到的试剂

硫酸  分析纯  、硫酸钾分析纯、硫酸铜分析纯 纳氏试剂  溶解17g氯huagong于300ML水中，另溶解35g碘化钾于100ml水中，将前液缓慢加入后液中至生成红色沉淀为止，加入600ML200g/l氢氧化钠溶液和剩余的氯huagong，储存于深色瓶，静置数日，取上清液于另一深色瓶内用橡皮塞塞紧，避光保存。硫酸铵标准溶液  精密称取80℃干燥的硫酸铵4.71g溶于0.01mol/l硫酸溶液中并定容至1000ml。此溶液为1.0mg/ml NH3-N.临用前用0.01mol/l H2SO4稀释至10.0ug/ml NH3-N.所需用水均为离子交换水或无铵蒸馏水。

紫外可见分光光度计测牛奶中蛋白质含量主要仪器

UV1901PC紫外可见分光光度计

UV1901PC紫外可见分光光度计测牛奶中蛋白质的实验方法

UV1901PC紫外可见分光光度计测牛奶中蛋白质的样品处理

精密称取0。2~1.0g固体样品或称取5~10ml液体样品于250ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，3g硫酸钾及10ml硫酸，摇匀后于瓶口放一小漏斗，倾斜置有小孔的石棉网隔热的电炉上，先小火加热，至样品炭化泡沫停止后，加大火力至液体呈蓝色澄清透明后，继续加热0.5h，取下放冷，小心加水，冷后分次洗入100ml容量瓶定容至刻度，准确吸取5ml定容后样品消化液于一100ml容量瓶，用水定容至刻度。即样品消化液稀释液备用，同时做试剂空白。准确吸取2.0-5.0ml样品消化稀释液和等量空白消化液0.0、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00、10.00ml分别于50ml纳氏比色管内，用0.01mol/l硫酸定容至刻度混匀，每管分别加入1.00ml纳氏试剂，混匀，10min后420nm波长，1.0CM比色皿蒸馏水校正零点比色，绘制回归标准曲线。

计算样品测定液和空白测定液中氮的含量

图1

方法与讨论

方法的线性范围，相关系数

氮含量在0.1-2.0ug/ml范围内线性良好，相关系数R=0.9993.

精密度试验取2份奶粉各分别测定6次结果见表1。

回收率和精密度

向氨基酸口服液中加入标准溶液进行回收率试验，并进行10次平行试验计算平均回收率和精密度。回收率和精密度均相当好。

方法应用

应用本方法测定了多份口服液、氨基酸冲剂、饲料等，方法重现性、回收率均令人满意。

结语

不经衍生直接测定样品中游离氨基酸，分析速度快，灵敏度高，定性和定量准确，适合各种样品中游离氨基酸的测定。

UV1901PC紫外可见分光光度计法测定乳及乳制品中的蛋白质含量，消耗试剂少，试剂成本低、降低劳动强度，能满足基层工作需要、简便、快速、灵敏、不失为一种好方法。