〔含量测定〕酸性羧甲基纤维素酶活力对照品溶液的
制备取无水葡萄糖对照品适量,精密称定,加水制成每lml
含3mg的溶液,即得。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液L 0ml、2。0ml、
4. 0ml、6. 0ml、8。0ml,分别置10ml量瓶中,各加水至刻度,摇__
匀。分别精密量取上述溶液各0= 5mU置25ml具塞刻度试管
中,精密加入枸橼酸盐缓冲液(pH t 8)1。5mU混匀,立即精密
加人3,5-二硝基水杨酸试液1。5ml,摇匀5置沸水浴中保温15
分钟,取出,置冰水浴中冷却10分钟,再加水至刻度,摇勻,静
置90分钟,以相应的试剂为空白,照紫外-可见分光光度法
(通则0401),在540nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐
标,葡萄糖量(mg)为横坐标,绘制标准曲线。
测定法取本品约LOg,精密称定9置具塞锥形瓶中,精
密加水100ml,密塞,旋转振摇(转速每分钟200转)6 0分
钟,滤过,作为供试品溶液(本液应临用新制)。精密量取
1%羧甲基纤维素钠溶液1。5ml,置25ml具塞刻度试管中,
精密加人供试品溶液0. 5mU混匀5置50°C水浴中保温30分
钟,取出n照标准曲线制备项下的方法,自“立即精密加人3,
5-二硝基水杨酸溶液L 5011”起5依法测定吸光度5从标准曲
线上读出供试品溶液中含还原糖的重量(mg)。空白管加
入1%羧甲基纤维素钠溶液1。5ml,置50°C水浴中保温30
分钟,取出,立即精密加人3,5-二硝基水杨酸试液L 5ml9
摇勻,精密加人供试品溶液0。5ml,混匀,照标准曲线制备
项下的方法,自“置沸水浴中保温1 5分钟”起,依法进行。
按下式计算:
X = A X l /0 . 5X100/W八 1一水分)X2
式中X— 酸性羧甲基纤维素酶活力,U /gl
A— 吸光度在标准曲线上查得的还原糖量,mg;
W— 取样量
2— 时间换算系数。
l g 固体酶在50°C±l°C、pH4. 8 条件下,1 小时水解1%
羧甲基纤维素钠底物,产生出相当于lm g葡萄糖的还原糖量
为一个酸性羧甲基纤维素酶活力单位,以U /g表示。
本品按干燥品计算,每l g 含酸性羧甲基纤维素酶活力不
得低于150U。
注:[1]3,5-二硝基水杨酸试液:取苯酚6。9g,加10% 氢
氧化钠溶液15ml使溶解,用水稀释至70ml,摇匀,再加亚硫
酸氢钠6. 9g,振摇使溶解(甲液取酒石酸钾钠255g,加
10%氢氧化钠溶液300ml使溶解,再加1%的3,5-二硝基水
杨酸溶液880ml9摇匀(乙液);将甲液与乙液混合5摇勻,得黄
色的溶液,贮于棕色瓶中,4°C放置7 天,备用。
[2]构橼酸盐缓冲液(pH 4. 8) :分别精密量取0. 5mol/L
枸橼酸溶液60ml、0. 5mol/L枸橼酸三钠溶液100ml,混勻,精
密量取上述溶液100ml,加水800ml,以3mol/L盐酸溶液或
3mol/L氢氧化钠溶液调节p H 值至4。8,移至1000ml量瓶
中,加水至刻度,摇匀,即得。
[3]1%羧甲基纤维素钠溶液;精密称取l .O g羧甲基纤维
素钠,置具塞锥形瓶中,精密加入枸橼酸盐缓冲液(PH4. 8)
80ml,称定重量,85°C±5°C边加热边磁力搅拌至*溶解,
放冷,再称定重量,用枸橼酸盐缓冲液(PH4. 8)补足减失的重
量,摇勻,以3mol/L盐酸溶液或3mol/L氢氧化钠溶液调节
p H值至4. 8,移至100ml量瓶中,加枸橼酸盐缓冲液
(pH4.8)至刻度9摇匀,即得。
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