羟胺残留量测定法

本法系依据在碱性条件下，羟胺与碘反应生成亚硝

酸. 然后与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，再与CT萘胺偶

联形成有色的偶氮化合物，采用紫外-可见分光光度法测

定羟胺的含童。

试剂（1) 6%乙酸钠溶液称取无水乙酸钠6g，加

适显水溶解并稀释至100ml混勻，即得。

(2) 1% 对氨基苯磺酸溶液称取对氨基苯磺酸

0. 50g，加适M 2 5 %乙酸溶液溶解后稀释至50ml，即得。

(3) 1 . 3 %碘溶液称取碘0.65g ; 溶于冰醋酸，稀

释至5 0 m l ,即得。于通风橱中配制和使用。

(4) 0. 4mol/L硫代硫酸钠溶液称取硫代硫酸钠

3. 16g，溶于适量水中，稀释至5 0 m l ,即得。

(5) 0. 6 % a-萘胺溶液称取a-萘胺0. 3 g . 溶于30%

乙酸，稀释至50ml，即得。于通风橱中配制和迚jfl。

盐酸羟胺对照品溶液的制备用水将盐酸羟胺对照品

定M 稀释至每l m l含lOOOnmol，作为贮备液。精密量取

贮备液适量，用水定量稀释至每l m l含150nmol、

120nmol、90nmol、60nmol 和 30nmol，作为不同浓度的对照品溶液，用前配制。

测定法精密量取供试品0.3ml置试管内，依次加

6 % 乙酸钠溶液1.3ml、1 % 对氨基苯磺酸溶液0.2ml及

1 . 3 %碘液0.1ml，混匀，放置1 0分钟，加0. 4mol/L硫

代硫酸钠溶液50M1，混匀脱色，加0. 6 % a-萘胺溶液40^1，

混匀，室温放置6 0分钟，经每分钟10 000转离心5 分钟

后，取上清液，照紫外-可见分光光度法C通则0401) , 在

波长52 0 n m处测定吸光度。精密量取不同浓度的对照品

溶液各0.3tnl，置试管中，自“依次加6% 乙酸钠溶液

中国药典2015年版

1.3ml”起，同法操作。精密量取水0.3ml置试管中，自

“加6 % 乙酸钠溶液1.3ml”起，同法操作，作为空白对

照。以对照品溶液的羟胺浓度对相应吸光度作直线回归，

求得直线回归方程；将测得的供试品的吸光度代人直线回

归方程，即得供试品的残留羟胺浓度（nmol/ml) ，再根据

供试品的蛋白质含量按下式计算出羟胺残留量（nmol/mg

蛋白质）。 •

供试品羟胺残留量— 供试品的残留羟胺浓度（nmol/ml)

(nmol/mg蛋白质） 供试品的蛋白质含量（mg/ml)