紫外可见分光光度计己二酰肼含量测定法

本法系依据在四硼酸钠存在的条件下，己二酰肼

( A D H ) 中的氨基基团能与三硝基苯磺酸（T N B S ) 发生

显色反应，采用紫外-可见分光光度法测定b 型流感嗜血

杆菌多糖衍生物中己二酰胼的含量。

试剂 （1 ) 己二酰肼对照品贮备液（lmg/ml) 精

密称定己二酰肼0. I00g，加水定容至100ml，于一20DC

保存。

( 2 )己二酰肼对照品工作液（20Mg/ml) 精密量取

A D H 对照品贮备液0.2ml，加水定容至10ml。

(3) 5 % 四硼酸钠溶液称取四硼酸钠（Na2B40 7 •

10H2O) 47.35g,加水定容至500ml，于室温保存。

(4) 3 % T N B S溶液量取T N B S 5ml, 加水定容至

50ml，于一20°C保存。

测定法量取5 % 四硼酸钠溶液1.0ml，加水lml，

混匀，再加人3 % T N B S 溶液0.3ml，混匀，于享温放置

15分钟，在波长500mn处测定吸光度，作为空白对照。

先将供试品用水稀释至己二酰肼浓度不高于2CVg/ml，

作为供试品溶液，然后取1.0ml，加人5% 四硼酸钠溶

液1.0ml，自“加人3 % T N B S 溶液0.3ml” 起同法

操作。

分别取己二酰胼对照品工作液0. 2ml、0. 4ml、

0.6ml、0.8ml、1.0ml于试管中，每管依次加水0.8ml、

0.6ml、0.4ml、0.2ml、O m l ,加人5% 四硼酸钠溶液

1. 0 m l ,自“加入3 % T N B S溶液0.3ml”起同法操作。

结果计算以己二酰肼对照品工作液的浓度对其相应

的吸光度作直线回归，求得直线回归方程，将供试品溶液

的吸光度代人直线回归方程，求出供试品溶液的己二酰肼

含量，根据稀释倍数计算供试品的己二酰肼含量。