UV1901PC紫外可见分光光度计测乙酰色氨测定法

本法系用紫外-可见分光光度法（吸收系数法）测定

人血白蛋白供试品中的乙酰-DL-色氨酸含量。

测定法用生理氯化钠溶液将供试品蛋白质稀释至

5 % ，即为供试品溶液。量取供试品溶液0.1ml，分别加

人生理氯化钠溶液0. 3ml和0. 3mol/L高氯酸溶液3. 6ml，

混匀；另取生理氯化钠溶液0.4ml，加0. 3mol/L高氯酸

溶液3. 6 m l ,混匀，作为空白对照。室温放置1 0分钟，

以每分钟3500转离心2 0分钟，取上清液在波长28 0 n m处

测定吸光度，用空白溶液调零点。按下式计算供试品中的

乙酰-DL-色氨酸含量：

供试品/V-乙酰-DL-色氨酸含量_ (A2SQ Xn) /5. 25

(mmol/g) P

式中〃为供试品的稀释系数；

5. 2 5为N -乙酰-DL-色氨酸的毫摩尔吸收系数；

P 为供试品的蛋白质含量，g/L。

3 1 1 3 苯酚测定法

本法系依据溴酸盐溶液与盐酸反应产生溴，遇苯酚生

成三溴苯酚，过量的溴与碘化钾反应释出碘，析出的碘用

硫代硫酸钠滴定液滴定，根据硫代硫酸钠滴定液的消耗

量，可计算出供试品中苯酚的4 量。

测定法精密量取供试品lml，置具塞锥形瓶中，加

水50ml，精密加人0. 02mol/L溴溶液（称取溴酸钾

0.56g，加溴化钾3g，加水溶解并稀释至1000ml) 15?

25ml (供试品含苯酚量0_ 3 % ?0 . 5 %时加25ml，小于

0.3%则加15ml)，沿瓶壁加人6mol/L盐酸溶液10ml，摇

匀，密塞，在暗处放置30分钟后，加2 5 %碘化钾溶液2ml

于具塞锥形瓶颈口，稍启瓶塞，使流下，密塞，摇匀。以

少量水洗瓶颈，用硫代硫酸钠滴定液（0.02mol/L) 滴定至

近终点时，加淀粉指示液约0.5ml，滴定至蓝色消失，并

将滴定的结果用空白试验校正。

按下式计算：

苯酚含量（％) - (V°~Vl) XcX15. 69X100

式中V。为空白试验消耗硫代硫酸钠滴定液的体积，ml;

V i 为供试品消耗硫代硫酸钠滴定液的体积，ml;

c为硫代硫酸钠滴定液的浓度，mol/L;

15. 6 9为苯酚分子量的1/6。

【附注】（1 )硫代硫酸钠滴定液（0. lmol/L) 的制备

及标定称取硫代硫酸钠26g与无水碳酸钠0. 20g，加新

沸过的冷水适量溶解并稀释至1000ml，摇勻，放置1 个

月后滤过。取在__________120°C干燥至恒重的基准重铬酸钾0. 15g，

精密称定，置碘瓶中，加水50ml溶解，加碘化钾2.0g,

轻轻振摇使溶解，加稀硫酸（5.7— 100) 4 0 m l ,摇匀，密

塞；在暗处放置1 0分钟后，加水250ml稀释，用本液滴

定至近终点时，加淀粉指示液（称取可溶性淀粉0.5g，

加水5ml混悬后缓缓倾人100ml沸水中，随加随搅拌，继

续煮沸2 分钟，冷却，倾取上层清液。本液应临用配制）

3 m l ,继续滴定至蓝色消失而显亮绿色，并将滴定的结果

用空白试验校正。每l ml硫代硫酸钠滴定液（0. lmol/L)

相当于4.903mg重铬酸钾。根据本液的消耗量与重铬酸

钾的取用量，算出本液的浓度，即得。

( 2 )硫代硫酸钠滴定液（0.02mol/L) 的制备精密

量取硫代硫酸钠滴定液（0. lmol/L) 100ml, 加水准确稀

释至500ml，摇匀。

( 3 )可做限度测定。