人参（Radix Ginseng）为五加科植物人参（Panax ginseng C. A. Mey.）的干燥根，中国药典记载，人参性 平，味甘、微苦。归脾、肺、心经。具有大补元气，复 脉固脱，补脾益肺，生津，安神的功效[1]。根据传统用 药经验，人参主根和须根均作为人参入药，随着人参炮 制加工方法的发展，市场上逐渐出现人参主根和须根两 个不同的用药部位，经验普遍认为人参主根的人参皂甙 含量相高于参须，主根的市场价格也高于须根。目前研 究人参的药用部位多为其主根，对须根的研究比较少。 本研究建立参须中人参总皂苷含量测定的方法，实验结 果表明该方法准确、快速，为参须的深入研究及质量控 制提供了更加可靠的方法。 1  仪器与试药 1.1  仪器  紫外分光光度计旋转蒸发器；分析天平（万分之一，  ；高速匀浆机 ；恒温水浴 锅；超声波清 洗器；循环水式 多用真空泵（。 1.2  试药  参须药材由广州中 医药大学中药学院赖小平教授鉴定为参须药材；人参皂 苷 Re 对照品（中国食品药品检定研究院，批号： 11041201）。香草醛（批号：20100315，）；高氯酸（批号：20100904，）；冰醋酸（批号：20090320)；乙醇（批号 20100806），均为分析纯。 2  方法与结果 2.1  对照品溶液与供试品溶液的制备  对照品溶液的 制备：取干燥的人参皂苷 Re 对照品 6mg，精密称定，置 5ml 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得 人参皂苷 Re 对照品储备液。再精密移取储备液 2ml 至 
 10ml 量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得浓度为 0.2412mg/ ml 的人参皂苷 Re 对照品溶液。 供试品溶液的制备：分别取 20100111 批样品约 0.05g，0.1g，0.2g，置圆底烧瓶中，加 75%乙醇 50ml， 加热回流 1.5h，放冷，滤过，滤渣用乙醇洗涤 2～3 次， 收集滤液，减压浓缩至无醇味，用 20ml 的蒸馏水溶解， 转移至分液漏斗中。萃取 3 次（20ml/10ml/5ml）， 弃去层。水层加入水饱和正丁醇萃取 4 次 （30ml/20ml/15ml/10ml），合并正丁醇萃取液，减压回 收正丁醇至干，用甲醇分次洗涤、转移至 25ml 容量瓶 中，甲醇定容。 2.2  测定波长的选择  精密吸取人参皂苷 Re 对照品溶 液 0.6ml，加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml，在 60℃下水浴加热 15min，冰水冷却 10min，加 入冰醋酸 5ml，摇匀即得待测定对照品溶液[4]。同时取供 试品溶液 0.6ml，按待测对照品溶液的显色方法进行显色 制备即得待测定供试品溶液。 照紫外-可见分光光度法（2010 版药典附录 V A ）[5] 测定。结果：人参皂苷与香草醛-高氯酸试剂显色后，于 540-560nm 处有明显紫外吸收，而且在 555nm 处有大 吸收，所以选择测定波长为 555nm。 
 2.3  线性关系考察  精密吸取人参皂苷 Re 对照品溶液 0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml 、0.8ml，水 浴蒸干，加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml，在 60℃下水浴加热 15min，冰水冷却 10min，加 入冰醋酸 5ml，摇匀[2]，于波长 555nm 处测定各溶液的吸光度。以人参皂苷 Re 重量(mg)为横坐标，以吸光度为 纵坐标，绘制标准曲线。实验结果显示人参皂苷在 24.12～193.00μg 范围内呈良好的线性关系，相关系数 r 为 0.9996，回归方程为 Y=4.997X+0.002809。 2.4  精密度试验  精密吸取浓度为 0.2412mg/ml 人参皂 苷 Re 对照品溶液 0.6ml，加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml，在 60℃下水浴加热 15min，冰水 冷却 10min，加入冰醋酸 5ml，摇匀，于 555nm 处连续 测定吸光度 5 次。结果测定值的 RSD 为 1.8%，提示仪 器精密度良好。 2.5  稳定性试验  取 20100111 批样品约 0.1g，精密称 定，按“2.1”项中供试品溶液的制备方法制备，精密量 取 0.3ml，加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml，在 60℃下水浴加热 15min，冰水冷却 10min，加 入冰醋酸 5ml，摇匀，在显色后 20min、25min、30min、 35min、45min、60min，于 555nm 处测定吸光度。结果 显示：在 60min 内测定值的 RSD 为 1.5%，表明溶液在 1h 内稳定，故本实验确定在显色后 1h 内测定。 2.6  重复性试验  取 20100111 批样品约 0.1g ，取 6 份， 精密称定，按“2.1”项中供试品溶液的制备方法制备。 分别精密量取供试品溶液各 0.3ml，水浴蒸干，加入 5% 的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml，在 60℃下水浴 加热 15min，冰水冷却 10min，加入冰醋酸 5ml，摇匀， 于 555nm 处测定吸光度，计算各份供试品溶液中人参皂 苷含量。结果参须中人参总皂苷含量为 81.47mg/g，SD 为 2.0，RSD 为 2.5%，提示本试验重复性良好。 2.7  加样回收率试验  人参皂苷 Re 对照品储备液的制 备：精密称取人参皂苷 Re 对照品 0.04004g，置 10ml 容 量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得浓度为 4.004mg/ml 的 人参皂苷 Re 对照品溶液。 取 20100111 批样品约 0.05g，6 份，精密称定，再 分别精密量取人参皂苷 Re 对照品储备液 1ml，按照供 试品制备方法制备，分别精密量取供试品溶液 0.3ml， 水浴蒸干，加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml，在 60℃下水浴加热 15min，冰水冷却 10min，加 入冰醋酸 5ml，摇匀，于 555nm 处测定吸光度，计算每 份溶液人参总皂苷含量。结果表明平均加样回收率为 102.3%，RSD 为 2.8%，提示该测定方法准确度高，结 果见表 1。 号为 20100111，20100823，20100824 参须药材约 0.1g， 精密称定，按“2.1”项中供试品溶液的制备方法制备。 分别精密吸取待测溶液 0.3ml 至刻度试管中，水浴蒸干， 加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml，在 60 ℃下水浴加热 15min，冰水冷却 10min，加入冰醋酸 5ml， 摇匀，于 555nm 处测定吸光度。人参总皂苷百分含量按 干燥品算，依次为 0.81%，1.01%，1.00%，均符合药典 人参总皂苷不得低于 0.8%的要求，结果见表 2。 
3  讨论 本项目以人参总皂苷为指标性成分，采用 5%香草醛 -高氯酸对溶液进行显色处理，显色的原理为高氯酸使皂 苷的羧基脱水，增加双键结构，再经双键位移，双分子 缩合等反应生成共轭双键系统，又在酸的作用下形成阳 碳离子盐而显色，从而可用紫外-可见分光光度法（比色 法）测定总人参皂苷的含量。 本研究采用紫外分光光度法测定参须中人参皂苷的 含量，该方法简便，准确度高，重现性好，可以作为参 须中人参皂苷含量的测定方法。