黄瓜籽为葫芦科植物黄瓜 Cucumber sativus L．的干燥 成熟种子。《中华本草》中记载其具有续筋接骨、祛风、消 痰的功效，主治骨折筋伤、风湿痹痛、老年痰喘［1］。黄瓜籽 中富含有多种氨基酸、活性肽、蛋白质等物质，能维持人体 的骨代谢，调节钙、磷代谢和骨容量，还具有聚集骨生长因 子及诱导骨生长因子分泌的作用。黄瓜籽中含有多种营养成 分，其中包含大量人体必需的脂肪酸、植物甾醇、糖和苷类、 挥发油以及多种无机盐等 [2,3]，但其所含总多糖、总皂苷及总 黄酮的含量尚未见报道。本研究采用紫外分光光度法对黄瓜 籽中以上三类物质的含量进行分析，为下一步药理实验提供 依据。为葫芦科甜瓜属植物黄瓜 (Cucumis sativ us L.) 的干燥成熟种子，使用前烘干并粉碎成粗粉。 葡萄糖对照品，批号 110833- 200503；牛血清白蛋白对照品， 批号 140619-200919；芦丁对照品，批号 100080-201408；薯 蓣皂苷元对照品，批号 111539-200001；以上对照品均购自于 中国药品生物制品检定所。蒽酮、浓硫酸、乙醇、丙酮、正丁醇、石油醚等均为分析纯，D101 大孔吸附树脂（天 津市汇达化工）、考马斯亮蓝（天津科密欧试剂）等。 2 方法与结果 2.1 黄瓜籽多糖的提取与含量测定 2.1.1 多糖的提取 [4] 称取黄瓜籽粗粉 100g，加 5 倍量 90% 乙醇加热回流提取 3 次，每次 2 h，过滤，合并滤液， 滤液回收乙醇。滤渣挥干乙醇，加水煎煮 3 次，每次 2 h，合 并滤液，加热浓缩至 60 ml，加 95% 乙醇调至溶液的乙醇浓度 为 80%，Sevage 法除蛋白后，于 4℃ 静置过夜，抽滤，沉淀 依次以无水乙醇、丙酮洗涤，并于 60 ℃ 烘干，得到粗多糖 提取物。 2.1.2 黄瓜籽多糖的含量测定 2.1.2.1 标准曲线的制备 [5] 精密称取 105℃干燥至恒重 的无水葡萄糖对照品约 10mg，置于 100ml 容量瓶中，加蒸馏表 1 胆酸线性范围测定结果 浓度（mg/ml） 0.00677 0.0135 0.0203 0.0270 0.0338 吸收度 0.1430 0.2768 0.3915 0.5389 0.6732 线性方程为：y=0.00793+19.53x 相关系数 r=0.9994，测 定结果表明胆酸在 0.00677~0.6732mg/ml 浓度范围内与吸收 度有良好线性关系。 4.3 讨论 通过对牛黄清感胶囊的薄层色谱分析，可以很好地鉴别 人工牛黄。结果斑点清晰，阴性无干扰，专属性强；利用工 作曲线法测定处方中人工牛黄的胆酸含量，为牛黄清感胶囊 质量的定量控制奠定了基础。

水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得 0.10 g /L 的葡萄糖对照 品溶液。再取上述对照溶液适量分别加水配成 0,0.02,0.03, 0.04,0.06,0.08,0.10g/L 的 溶 液，分别吸取不同浓度溶 液1ml置 10 ml具塞试管中，每管各加入0.2% 蒽酮 - 硫 酸溶液 4 ml，待各管加完后同时摇匀，置于沸水中加热 15min，取出后迅速置于冷水中冷却至室温，放置10min， 于 627nm 处测定吸光度，以葡萄糖浓度C为横坐标，吸光 度 A 为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=0.0072X+0.0044 (R2=0.9992)，表明样品在 0.00 ～ 0.10g/L 范围内线性关系 良好。 2.1.2.2 黄瓜籽多糖的含量测定 精密称取干燥至恒重的黄 瓜籽粗多糖样品 10mg，置于 100ml 容量瓶中，加蒸馏水溶解 并稀释至刻度，摇匀，得浓度为 0.1 g/L的黄瓜籽粗多糖溶液。 精密吸取黄瓜籽粗多糖溶液 1.0 ml，按 2.1.2.1 项下方法测 定吸光度，由回归方程计算样品中总多糖含量。 2.1.3 结果 2.1.3.1 Sevage 法除蛋白结果 粗多糖样品经Sevage 法 多次除蛋白，以牛血清白蛋白为对照品，通过考马斯亮蓝法 （UV,595nm) 测定残留蛋白的含量，结果见表 1。 样品处理 标准曲线方程 蛋白含量 % 除蛋白前 Y=0.0083X+0.0502 
(R2=0.9996)
33.18 第三次除蛋白 14.87 第五次除蛋白 14.51 第六次除蛋白 14.41 由表 1 可见，第五次、第六次除蛋白后样品中残留蛋白 含量分别为 14.51% 和 14.41%，含量变化不大，因此不再继续 除蛋白。 2.1.3.2 粗多糖提取物性状、提取率及含量 黄瓜籽粗多糖 提取物为白色粉末状，得率为 4.59%。粗多糖提取物中多糖含 量为 23%，占生黄瓜籽的 1.06%。 2.2 黄瓜籽总黄酮含量测定 2.2.1 总黄酮提取物的制备 [6] 称取黄瓜籽粗粉 500g，加 4 倍量石油醚于 50℃ 水浴中加热回流提取 3 次，每次 2 h， 滤过，合并滤液，回收石油醚除去脂肪油部分，药渣置通风 处放置挥干石油醚，加入 3 倍量 75% 乙醇溶液，加热回流提 取 3 次，每次 2 h，滤过，合并滤液，减压浓缩，将浓缩液 均分成两份，冷藏一份备用。另一份加 100ml 蒸馏水混匀， 经大孔吸附树脂 D101（已经预处理）分离纯化，先用 3BV 蒸 馏水静止吸附 24h，再依次加入 2BV 的 20% 乙醇洗脱、2BV 的 50% 乙醇洗脱、4BV 的 75% 乙醇进行洗脱，合并洗脱液，回收 乙醇 , 干燥即得总黄酮粗提物。 2.2.2 总黄酮的含量测定 2.2.2.1 标准曲线的绘制 [7] 精密称取芦丁对照品 0.1260g 置于 10ml 容量瓶中，加70%乙醇溶液使之溶解并定容至刻 度，摇匀，即得芦丁对照品溶液。精密吸取芦丁对照品溶液 0, 1, 2, 3, 4, 5 ml，分别置于 10ml 容量瓶中，加 0.05g/ml 亚硝酸钠溶液 0.3ml，摇匀后放置 6min，加 0.1g/ml 硝酸铝 溶液 0.3ml，摇匀后放置 6min，加 1.0mol/L 氢氧化钠溶液 4.0mL，再用 70% 乙醇溶液定容至刻度，摇匀，放置 15min。 于 510nm 测定吸光度值，得到回归方程为 Y=0.0115X-0.0094 (R2=0.9990)，表明样品在 0.00 ～ 0.756 g/L 范围内线性关 系良好。 2.2.2.2 总黄酮的含量测定 精密称取 2.2.1 处理好的总黄 酮样品 0.5213g 于 10ml 容量瓶中，加 70% 乙醇溶解并定容至 刻度，摇匀，再准确吸取 1ml 溶液于 10ml 容量瓶中，按照标 准溶液制备方法进行实验并测定吸光度。 2.2.3 结果 经上述制备方法得到的总黄酮样品为1.0665g，得率为 0.43%。根据回归方程计算提取物中总黄酮含量为 67.98%，占生药量的 0.29%。 2.3 黄瓜籽总皂苷的提取分离及含量测定 2.3.1 总皂苷的提取分离[8] 取 2.2.1 中冷藏储备样品 17.97g加5倍体积的蒸馏水溶解，用乙酸乙酯萃取两次，每 次 90ml，水层再用水饱和正丁醇萃取三次，每次 90ml，合并 正丁醇层，回收正丁醇，干燥即得黄瓜籽总皂苷提取物。 2.3.2 总皂苷的含量测定 2.3.2.1 标准曲线的绘制 [9] 精密称定薯蓣皂苷元对照品约 3mg, 置于 10ml 容量瓶中 , 加甲醇溶解并定容，得到对照品 溶液。精密吸取对照品溶液 0，0.3，0.4, 0.6, 0.8, 1.0ml 分别置于 10ml 容量瓶 , 挥干溶剂 , 加高氯酸至刻度，摇匀， 65℃水浴加热显色 15 min，取出后立即置于冰水浴中 15min 后停止反应，于 410 nm 波长处测定吸光度值。计算得回归方 程为 Y = 8.348X+ 0.078（R2= 0.997），结果表明薯蓣皂苷 元在 0.0 ～ 0.3 g /L 范围内与吸光度呈良好的线性关系。 2.3.2.2 样品总皂苷的含量测定 称取2.3.1 中得到的总 皂苷提取物0.3456g 于 10 ml 容量瓶中，加甲醇溶解并定 容，准确吸取 1ml 于 10ml 容量瓶中，同法制成样品溶液并于 410nm 波长处测定吸光度。 2.3.3 结果 上述制备方法得到黄瓜籽总皂苷1.45g，提 取率为 0.58%，根据回归方程计算得提取物中总皂苷含量为 30.22%，占生药量的 0.18%。 3 讨论 总多糖提取物中 , 常伴有无机盐、蛋白质、色素及醇不 溶性小分子有机物 ( 如低聚糖 ) 等杂质 , Sevage 法是常用的 除蛋白方法。本研究经 6 次除蛋白后，残留蛋白含量相对稳 定，可能是糖与蛋白形成糖蛋白复合物 , 使蛋白质的脱除更 加困难。黄瓜籽经提取分离得到的提取物中总黄酮含量达到 67.98%，说明此方法应用于黄瓜籽总黄酮的分离纯化良好； 另一提取物中总皂苷含量为 30.22%，由于方法中采用溶剂萃 取法进行分离达不到更好地纯化皂苷的作用，还需进一步通 过离子交换树脂等方法进行纯化。本实验目的之一是为了检 测黄瓜籽中总黄酮、总皂苷及总多糖的含量，三种物质中总 多糖的含量高，总皂苷的含量低，其次是得到各有效组 份提取物用于抗骨质疏松作用机理研究。